Hlavní Bronchitida

Vyčištěný alergen na tuberkulózu ve standardním ředění

Dodatek N 4
na příkaz Ministerstva zdravotnictví Ruské federace
ze dne 21. března 2003, N 109

Návod k použití tuberkulinových testů

I. Účel žádosti

Tuberkulinová diagnóza je diagnostický test ke stanovení specifické senzibilizace těla na mycobacterium tuberculosis (MBT). Jako specifický test se používá při hromadném screeningu populace na tuberkulózu (hromadná tuberkulinová diagnostika) a na individuální vyšetření (individuální tuberkulinová diagnostika).

1.1. Cíle hromadné diagnostiky tuberkulinu:

- identifikace osob nově infikovaných MBT („ohyb“ tuberkulinových testů);

- identifikace osob s hyperergickými a zesilujícími reakcemi na tuberkulin;

- výběr kontingentů pro očkování proti tuberkulóze vakcínou BCG-M u dětí ve věku 2 měsíce a starších, které nebyly očkovány v nemocnici, a pro revakcinaci vakcínou BCG;

- včasná diagnostika tuberkulózy u dětí a dospívajících;

- stanovení epidemiologických ukazatelů tuberkulózy (míra infekce populace MBT, roční riziko infekce MBT).

Pro hromadnou diagnostiku tuberkulinu se používá pouze jediný intradermální tuberkulinový test Mantoux se 2 tuberkulinovými jednotkami (TE) čištěného tuberkulinu ve standardním ředění (hotová forma).

1.2. Cíle individuální diagnostiky tuberkulinu:

- diferenciální diagnostika postvakcinační a infekční alergie na tuberkulin;

- diagnostika a diferenciální diagnostika tuberkulózy a jiných nemocí;

- stanovení „prahu“ individuální citlivosti na tuberkulin;

- stanovení aktivity tuberkulózního procesu;

- hodnocení účinnosti léčby proti tuberkulóze.

Pro individuální diagnostiku tuberkulinu se kromě Mantouxova testu s 2 TU čištěného tuberkulinu ve standardním ředění používá Mantouxův test s různými dávkami tuberkulinu, odstupňovaný kožní test Pirquet, Kochův test, stanovení titru tuberkulinu atd. Pro individuální diagnostiku tuberkulinu použijte: čištěný tuberkulin a suchý čištěný tuberkulin.

II. Tuberkulinové přípravky

Tuberkulinové přípravky - přípravky z MBT antigenů nebo jejich kultivačních filtrátů, zpracované různými způsoby.

Je povoleno používat pouze tuberkulinové přípravky registrované v Ruské federaci.

Tuberkulinové přípravky se používají pro diagnostiku tuberkulinu (čištěné tuberkuliny) a pro detekci protilátek proti MBT (diagnostický systém suchého antigenu tuberkulózy erytrocytů a testovací systémy ELISA).

2.1. Purifikovaný tuberkulin (PPD) - derivát purifikovaného proteinu (PPD)

Vyrábí se ze směsi lidských a hovězích druhů MBT kultivačních filtrátů usmrcených zahříváním, čištěných ultrafiltrací, vysrážených kyselinou trichloroctovou a zpracovaných ethylalkoholem a etherem. Používají se dva typy čištěného tuberkulinu.

Alergenová tuberkulózní čištěná kapalina (čištěný tuberkulin ve standardním ředění) - roztoky tuberkulinu připravené k použití. Léčivo je roztok purifikovaného tuberkulinu ve fosfátovém pufru s tween-80 jako stabilizátor a fenol jako konzervační látka, bezbarvá průhledná kapalina. Léčivo se vyrábí v ampulích jako roztok obsahující 2 TE PPD-L v 0,1 ml. Možné uvolnění 5 TE, 10 TE v 0,1 ml a dalších dávkách léku. Datum vypršení platnosti - 1 rok. Uvolnění šlechtění PPD-L připraveného k okamžitému použití (modifikace Linnikové) umožňuje použít lék, který je standardní v činnosti pro masovou diagnostiku tuberkulinu v zemi, a vyhnout se chybám při šlechtění tuberkulinu v místech jeho použití..

Alergenový tuberkulózní čištěný suchý (suchý čištěný tuberkulin) je lyofilizovaný čištěný tuberkulin rozpuštěný ve fosfátovém pufru se sacharózou. Lék je ve formě suché kompaktní hmoty nebo prášku bílé (slabě šedavé nebo krémové) barvy, který se snadno rozpouští v dodávaném rozpouštědle - karbolizovaný izotonický roztok chloridu sodného. K dispozici v ampulích obsahujících 50 000 TEU. Doba použitelnosti je 5 let. Suchý čištěný tuberkulin se používá k diagnostice tuberkulózy a tuberkulinové terapie pouze v antituberkulózních lékárnách a nemocnicích.

Specifická aktivita tuberkulinových léků je stanovena a sledována ve vztahu k národnímu standardu tuberkulinového PPD.

Každá krabička s tuberkuliny obsahuje pokyny pro použití léků s jejich podrobnými charakteristikami. Seznámení s tímto pokynem lékaře a sestry před diagnostikováním tuberkulinu je povinné.

2.2. Přípravky pro detekci protilátek proti mycobacterium tuberculosis

Diagnosticum erythrocyte tuberculosis antigenní suchý - jehněčí erytrocyty senzibilizované s MBT fosfatidovým antigenem, porézní hmotou nebo červenohnědým práškem. Určeno k detekci specifických protilátek proti antigenům MBT při reakci nepřímé hemaglutinace (RNGA). Na klinice se tuberkulóza používá jako imunologický test k určení aktivity procesu a účinnosti léčby. Imunologický testovací systém pro stanovení protilátek proti původci tuberkulózy. Jedná se o sadu přísad pro enzymově vázaný imunosorbentní test na nosiči na pevné fázi. Určeno k detekci protilátek proti původci tuberkulózy v krevním séru pacientů. Používá se pro laboratorní potvrzení diagnózy tuberkulózy různé lokalizace, hodnocení účinnosti léčby, jmenování specifické imunokorekce. Citlivost enzymového imunotestu na tuberkulózu je 60-70% a specificita je přibližně 90%, což neumožňuje použití testovacího systému pro screening infekce tuberkulózy.

III. Technika testu Mantoux pro hromadnou diagnostiku tuberkulinu

K provedení intradermálního testu Mantoux se používají jednorázové tuberkulinové stříkačky na jedno použití s ​​tenkými krátkými jehlami s krátkým šikmým řezem. Je zakázáno používat stříkačky a jehly, jejichž doba použitelnosti již vypršela, proto je před použitím nutné zkontrolovat datum vydání a datum exspirace. Používání inzulínových stříkaček pro diagnostiku tuberkulinu je zakázáno.

Odebrání tuberkulinu z ampule: ampule s léčivem se opatrně otře gázou navlhčenou 70 ° ethylalkoholem, poté se hrdlo ampule naplní nožem k otevření ampulí a odlomí se. Extrakce tuberkulinu z ampule se provádí injekční stříkačkou, která se používá k provedení testu Mantoux, a jehlou N 0845. Odeberte 0,2 ml (tj. Dvě dávky) tuberkulinu, nasaďte jehlu tuberkulinové injekční stříkačky, uvolněte roztok po značku 0,1 do sterilního vatového tamponu. Ampule po otevření se uchovává za aseptických podmínek nejdéle 2 hodiny.

Test Mantoux se vždy provádí u pacientů vsedě, protože u emočně labilních osob může injekce způsobit mdloby.

Na vnitřní povrch střední třetiny předloktí je oblast kůže ošetřena 70 ° ethylalkoholem, vysušena sterilní vatou. Do horních vrstev natažené kůže (intradermálně) rovnoběžně s jejím povrchem je vložena tenká jehla s řezem nahoru. Po zavedení otvoru jehly do kůže ze stříkačky se vstříkne 0,1 ml roztoku tuberkulinu, tj. jednu dávku. Při správné technice se v kůži vytvoří papule ve formě „citronové kůry“ o velikosti bělavé barvy o průměru nejméně 7–9 mm..

Test Mantoux provádí speciálně vyškolená sestra na lékařský předpis.

Výsledky tuberkulinového testu hodnotí lékař nebo speciálně vyškolená zdravotní sestra, která test provedla.

IV. Vyhodnocení výsledků testu Mantoux s 2 TE

Výsledek testu Mantoux se hodnotí po 72 hodinách měřením velikosti infiltrátu (papule) v milimetrech (mm). K měření a zaznamenávání příčné (vzhledem k ose předloktí) velikosti infiltrátu se používá pravítko s milimetrovými děleními. Při absenci infiltrace se s přihlédnutím k reakci na Mantouxův test měří a zaznamenává hyperemie.

Při stanovení testu Mantoux se bere v úvahu reakce:

- negativní při úplné absenci infiltrace (papuly) nebo hyperemie nebo v přítomnosti injekční reakce (0-1 mm);

- pochybné s infiltrací 2-4 mm nebo pouze s hyperemií jakékoli velikosti bez infiltrace;

- pozitivní v přítomnosti infiltrátu o průměru 5 mm nebo více.

Reakce s velikostí infiltrátu o průměru 5-9 mm, průměrnou intenzitou - 10-14 mm, výraznou - 15-16 mm jsou považovány za slabě pozitivní. Hyperergické u dětí a dospívajících jsou považovány za reakce s průměrem infiltrace 17 nebo více, u dospělých 21 mm nebo více, stejně jako vezikulárně-nekrotické reakce bez ohledu na velikost infiltrátu s lymfangitidou nebo bez ní; rostoucí reakce na tuberkulin je považována za zvýšení infiltrátu o 6 mm nebo více ve srovnání s předchozí reakcí.

V. Hromadná diagnostika tuberkulinu u dětí a dospívajících

Pro hromadnou diagnostiku tuberkulinu se používá test Mantoux s 2 TE PPD-L:

a) pro včasné odhalení počátečních a lokálních forem tuberkulózy u dětí a dospívajících. Za tímto účelem se sleduje dynamika postvakcinační alergie a detekuje se primární infekce („ohnutí“ tuberkulinových reakcí) a u osob dříve infikovaných tuberkulózou se stanoví hyperergické a rostoucí reakce;

b) pro výběr kontingentů, které byly očkovány proti tuberkulóze, a také před základním očkováním dětí ve věku 2 měsíců a více, které nebyly očkovány v porodnici;

c) určit infekci MBT a riziko primární infekce.

Správná interpretace reakce na Mantouxův test s 2 TE pro včasnou identifikaci skupin se zvýšeným rizikem onemocnění a stanovení infekce MBT je zajištěna dodržováním přesné techniky provedení tuberkulinového testu a posouzení reakce na něj.

5.1. Organizace hromadné tuberkulinové diagnostiky

V organizovaných skupinách provádí hromadnou tuberkulinovou diagnostiku speciálně vyškolený zdravotnický personál instituce nebo je preferována týmová metoda. S brigádní metodou vyšetření dětí a dospívajících je dětským poliklinikám přiděleno vytvoření speciálních týmů (2 sestry a lékař) pro hromadnou diagnostiku tuberkulinu u organizovaných dětí (školky, školky, školy) a BCG revakcinace v deklarovaných věkových skupinách školáků. Ze stávajících pracovníků poliklinik a dětských ústavů přiděluje hlavní lékař polikliniky zdravotnický personál a schvaluje také harmonogram jeho práce v dětských týmech. Pro neorganizované děti v raném a předškolním věku jsou na dětské klinice prováděny testy Mantoux s 2 TE PPD-L. Ve venkovských oblastech tuberkulinovou diagnostiku provádějí okresní venkovské okresní nemocnice a feldshersko-porodnické stanice.

Metodické vedení testu Mantoux provádí pediatr antituberkulózní lékárny (ordinace). Při absenci antituberkulózního lékárny (ordinace) práci provádí vedoucí poliklinického oddělení pro dětství (okresní pediatr) spolu s místním ftiziatrem.

U zdravých dětí a dospívajících infikovaných MBT, stejně jako u pozitivní (pochybné) postvakcinační citlivosti na tuberkulin a u dětí s negativní reakcí na tuberkulin, avšak bez revakcinace BCG, lze všechna profylaktická očkování provést ihned po vyhodnocení výsledků testu Mantoux. V případě "ohnutí" tuberkulinových reakcí, stejně jako hyperergické nebo zesilující reakce na tuberkulin, bez funkčních a lokálních projevů tuberkulózy u dětí, se preventivní očkování provádí nejdříve o 6 měsíců později.

Výsledky testu Mantoux u dětí a dospívajících jsou zaznamenány v registračním formuláři N 063 / rok, v lékařském záznamu dítěte (formulář N 026 / rok) a v historii vývoje dítěte (formulář N 112 / rok). Zároveň si povšimněte: a) výrobce tuberkulinu, číslo šarže, trvanlivost; b) datum vzorku; c) injekce léku do pravého nebo levého předloktí; d) výsledek testu - ve formě velikosti infiltrátu (papule) v mm; při absenci infiltrace uveďte velikost hyperemie.

Když dítě vstoupí do dětské nemocnice, sanatoria nebo sanatoria, musí být všechny údaje o předchozích intradermálních tuberkulinových testech přeneseny do vývojové anamnézy, lékařského záznamu dítěte (formulář N 112 / rok nebo formulář N 026 / rok) nebo do výpisu z lékařské anamnézy... Informace o preventivním očkování a výsledcích tuberkulinových testů (formulář N 063 / r) se přenáší do adolescentních ambulancí v ambulancích po dosažení věku 15 let a také v místě studia adolescenta - do středních odborných vzdělávacích institucí (odborné školy, technické školy, školy), na univerzitu.

Při správné organizaci opatření pro včasné odhalení tuberkulózy by mělo být tuberkulinovou diagnostikou každý rok pokryto 90–95% dětské a dospívající populace správního území..

Test Mantoux s 2 TE PPD-L je neškodný jak pro zdravé děti a dospívající, tak pro lidi s různými somatickými chorobami. Předchozí onemocnění a předchozí očkování však mohou ovlivnit citlivost pokožky dítěte na tuberkulin, posílit ji nebo oslabit. To komplikuje následnou interpretaci dynamiky citlivosti na tuberkulin a je základem pro stanovení seznamu kontraindikací.

Kontraindikace pro stanovení tuberkulinových testů s 2 TU během období masové tuberkulinové diagnostiky:

- kožní onemocnění, akutní a chronická infekční a somatická onemocnění (včetně epilepsie) během exacerbace;

- alergické stavy, revmatismus v akutních a subakutních fázích, bronchiální astma, idiosynkrázy s výraznými kožními projevy během exacerbace.

Za účelem identifikace kontraindikací provede lékař (zdravotní sestra) před odběrem vzorků tuberkulinu studii lékařské dokumentace, jakož i průzkum a vyšetření osob, které byly předmětem vzorku. Není povoleno provádět test Mantoux v těch dětských skupinách, kde existuje karanténa pro dětské infekce. Test Mantoux se umístí 1 měsíc po vymizení klinických příznaků nebo bezprostředně po zrušení karantény.

Preventivní očkování může také ovlivnit citlivost na tuberkulin. Na základě toho by měla být naplánována diagnostika tuberkulinu před profylaktickým očkováním proti různým infekcím (DPT, spalničky atd.). V případech, kdy se z nějakého důvodu test Mantoux neprovádí dříve, ale po různých preventivních očkováních, by měla být tuberkulinová diagnostika provedena nejdříve 1 měsíc po očkování.

5.2. Provádění a interpretace testu Mantoux s 2 TE PPD-L u dětí a dospívajících

Za účelem včasného zjištění tuberkulózy se Mantouxův test s 2 TE podává všem dětem očkovaným proti tuberkulóze od 12 měsíců věku a dospívajícím ročně, bez ohledu na předchozí výsledek.

Dětem, které nebyly během novorozeneckého období očkovány vakcínou BCG, se při zachování lékařských kontraindikací podávají dvakrát ročně Mantoux test, počínaje věkem 6 měsíců, dokud dítě vakcínu BCG-M nedostane. Zkouška Mantoux se provádí na vnitřním povrchu předloktí: střídají se pravé a levé předloktí. Doporučuje se provádět tuberkulinový test ve stejnou dobu roku, zejména na podzim..

Za účelem zjištění primární infekce během masové diagnostiky tuberkulinu by měli být k dětskému lékaři odesláni následující děti:

- s podezřením na „ohnutí“ tuberkulinových testů;

- se zvyšující se citlivostí na tuberkulin;

- s hyperergickou citlivostí na tuberkulin.

Děti odeslané k ftiziatrovi musí mít u sebe informace:

- o očkování (revakcinace BCG);

- o výsledcích tuberkulinových testů podle let;

- o kontaktu s pacientem s tuberkulózou;

- o fluorografickém zkoumání prostředí dítěte;

- o minulých chronických a alergických onemocněních;

- o předchozích vyšetřeních u ftiziatra;

- údaje o klinickém a laboratorním vyšetření (obecná analýza krve a moči);

- závěr příslušných odborníků za přítomnosti souběžné patologie.

Když lékař rozhodne, zda je pozitivní reakce na tuberkulin u dítěte (dospívajícího) spojena s infekcí MBT nebo zda odráží postvakcinační alergii, je třeba vzít v úvahu:

- intenzita pozitivní tuberkulinové reakce;

- počet obdržených očkování BCG;

- přítomnost a velikost jizev po očkování;

- čas uplynulý po očkování;

- přítomnost nebo nepřítomnost kontaktu s pacientem s tuberkulózou;

- přítomnost klinických příznaků onemocnění.

Při interpretaci dynamiky citlivosti na tuberkulin je třeba mít na paměti, že intenzitu reakcí na test Mantoux lze ovlivnit řadou faktorů, které určují obecnou reaktivitu těla: přítomnost somatické patologie, celková alergická nálada těla, fáze ovariálního cyklu u dívek, individuální povaha citlivosti kůže, rovnováha výživy dítěte. atd. Nepříznivé faktory prostředí mají výrazný dopad na výsledky masové tuberkulinové diagnostiky: zvýšené záření pozadí, přítomnost škodlivých emisí z chemického průmyslu atd. Výsledky tuberkulinové diagnostiky mohou být ovlivněny různými porušeními metodiky její implementace: používání nestandardních a nekvalitních nástrojů, chyby v technice nastavení a čtení výsledků testu Mantoux, porušení transportu a skladování tuberkulinu.

Infikované MBT by měly být považovány za osoby, které za přítomnosti spolehlivých údajů o dynamice citlivosti na tuberkulin podle testu Mantoux s 2 TE PPD-L zaznamenají:

- poprvé pozitivní reakce (papule 5 mm nebo více), která není spojena s imunizací vakcínou BCG („ohyb“);

- přetrvávající (po dobu 4-5 let) přetrvávající reakce s infiltrací 12 mm nebo více;

- prudké zvýšení citlivosti na tuberkulin (o 6 mm nebo více) do jednoho roku (u dětí a dospívajících pozitivních na tuberkulin);

- postupné, během několika let, zvýšená citlivost na tuberkulin s tvorbou infiltrátu 12 mm nebo více.

Všechny děti (starší tří let), u kterých došlo k přechodu dříve negativních tuberkulinových reakcí na pozitivní, stejně jako děti se zvýšenou citlivostí na tuberkulin v přítomnosti kontaktu s pacientem s tuberkulózou, po vyloučení aktivního procesu tuberkulózy, jsou registrovány u PTD pro skupinu VI.

První pozitivní reakce na tuberkulin u dvou až tříletého dítěte může být projevem postvakcinační alergie. Objektivní posouzení stavu dítěte, epidemiologické anamnézy a dynamické sledování dítěte ve skupině „0“ s opakovanou tuberkulinovou diagnostikou po 3 měsících umožní vyhnout se případům hypo- nebo nadměrné diagnózy při rozhodování, zda dodržovat dispenzar TB. Vyšetřování těchto dětí se provádí v zařízeních obecné lékařské sítě.

Zvýšení citlivosti na tuberkulin (včetně hyperergních reakcí) u dětí a dospívajících se somatickou patologií, bakteriální infekcí, alergií a častým nachlazením někdy není spojeno s infekcí MBT, ale s vlivem uvedených nespecifických faktorů. Pokud je obtížné interpretovat povahu citlivosti na tuberkulin, podléhají děti také předběžnému pozorování ve skupině „0“ dispenzární registrace s povinnou léčbou a profylaktickými opatřeními v pediatrické oblasti (hyposenzitizace, sanitace ložisek infekce, odčervení, dosažení období remise u chronických onemocnění) pod dohledem dětského ftiziatika. Opakované vyšetření v lékárně se provádí za 1-3 měsíce. Snížení po nespecifické léčbě citlivosti na tuberkulin naznačuje nespecifickou povahu alergie. U dětí s častými klinickými projevy nespecifických alergií se doporučuje umístit test Mantoux 2 TE při užívání desenzibilizujících látek po dobu 7 dnů (5 dní před a 2 dny po něm). Zachování citlivosti na tuberkulin na stejné úrovni nebo jeho další zvýšení navzdory terapeutickým a profylaktickým opatřením potvrzuje infekční povahu alergie a vyžaduje následné dispenzární pozorování dítěte.

Diagnostická opatření při registraci dítěte do dispenzární skupiny zahrnují:

- tuberkulinová diagnostika (Mantouxův test s 2 TE, kožní odstupňovaný test);

- obecné klinické testy krve a moči.

Účelem každoročního testu Mantoux u dětí a dospívajících, o nichž je známo, že jsou infikováni MBT, je identifikovat jedince s hyperergickými reakcemi nebo s prudkým nárůstem menších reakcí, což naznačuje riziko vzniku lokální tuberkulózy.

Za účelem výběru dětí a dospívajících k revakcinaci BCG je test Mantoux s 2 TE PPD-L zařazen do deklarovaných věkových skupin - 7 let (0-1 stupně střední školy) a 14 let (8-9 ročníků). Revakcinace se provádí u neinfikovaných tuberkulóz, klinicky zdravých osob, s negativní reakcí na test Mantoux s 2 TE PPD-L.

Vi. Individuální diagnostika tuberkulinu

K diagnostice lokální tuberkulózy podle klinických indikací se používá individuální tuberkulinová diagnostika bez ohledu na datum předchozího testu. Neexistují žádné kontraindikace, s výjimkou individuální nesnášenlivosti tuberkulinu.

Diagnostický tuberkulinový test s použitím čištěného tuberkulinu ve standardním ředění (2 TU) lze provést v antituberkulózních výdejnách, dětských klinikách, nemocnicích pro somatické a infekční choroby.

Diagnostický tuberkulinový test za použití suchého čištěného tuberkulinu (dodatek N 1) lze provést pouze v antituberkulózních výdejnách, tuberkulózních nemocnicích a sanatoriích.

6.1. Hlavní indikace pro individuální diagnostiku tuberkulinu jako diagnostický test

Individuální diagnostika tuberkulinu jako diagnostický test se provádí v následujících případech:

- v přítomnosti chronických onemocnění různých orgánů a systémů s torpickým, zvlněným průběhem, s neúčinností tradičních léčebných metod a přítomností dalších rizikových faktorů pro MBT infekci a tuberkulózu (kontakt s pacientem s tuberkulózou, nedostatečné očkování proti tuberkulóze, sociální rizikové faktory atd.) ;

- určit aktivitu tuberkulózního procesu;

- určit lokalizaci tuberkulózního procesu;

- posoudit účinnost provedené antituberkulózní léčby.

Pro individuální diagnostiku se používá test Mantoux s 2 TU purifikovaného tuberkulinu ve standardním ředění, odstupňovaný kožní test, intradermální testy Mantoux s různými ředěními suchého purifikovaného tuberkulinu a stanovení intradermálního titru tuberkulinu. Technika provádění těchto diagnostických metod se odráží v pokynech k použití alergenu na tuberkulózu, čištěného na sucho.

6.2. Použití tuberkulinového testu u rizikových skupin tuberkulózy

Děti, které potřebují tuberkulinový test s 2 TE dvakrát ročně v obecné lékařské síti:

- pacienti s diabetes mellitus, peptickým vředem, krevními chorobami, systémovými chorobami, infikovaní HIV, dlouhodobě užívající hormonální léčbu (déle než 1 měsíc);

- s chronickými nespecifickými onemocněními (pneumonie, bronchitida, tonzilitida), subfebrilní stav nejasné etiologie;

- nebyli očkováni proti tuberkulóze bez ohledu na věk dítěte.

V azylových domech, střediscích pro dočasnou izolaci mladistvých pachatelů, přijímacích střediscích a v jiných zařízeních pro děti a dospívající ze sociálně rizikových skupin, které nemají lékařskou dokumentaci, se při přijetí dítěte do tohoto zařízení provádí tuberkulinový test Mantoux s 2 TE PPD-L a poté 2krát ročně po dobu 2 let s nepřetržitým lékařským dohledem s následným přechodem na roční tuberkulinovou diagnostiku.

U dětí a dospívajících ze skupin se sociálním rizikem (včetně migrantů a uprchlíků), kteří mají při podávání žádosti u dětských a dospívajících skupin lékařskou dokumentaci, se provede tuberkulinový test Mantoux se 2 TE PPD-L, pokud od předchozího testu uplynulo více než 6 měsíců a poté 1krát ročně s pravidelným lékařským dohledem.

Všechny děti a dospívající ze skupin se sociálním rizikem, kteří mají výraznou reakci na tuberkulin (papule 15 mm nebo více), by měli být vyšetřeni a sledováni v antituberkulózních lékárnách (ve skupině VI B).

VII. Sada nástrojů a materiálů pro tuberkulinovou diagnostiku

1. Bix o rozměrech 18 x 14 cm se sterilními vatovými kuličkami.

2. Jednorázové tuberkulinové stříkačky s tenkými krátkými jehlami s krátkým šikmým řezem.

3. Pravítka o délce 100 mm z plastu.

4. Láhev o objemu 50 ml s amoniakem.

5. Láhev o objemu 50 ml s ethanolem.

6. Injekční jehly N 0840 pro extrakci tuberkulinu z lahvičky.

7. Anatomické kleště dlouhé 15 cm.

VIII. Vypracování plánu diagnostiky tuberkulinu a výpočet potřeby vyčištěného tuberkulinu ve standardním ředění

Příprava plánu diagnostiky tuberkulinu v oblasti služeb ambulancí provádějí hlavní lékaři ústavů za účasti antituberkulózních výdejen.

Konsolidovaný plán zajišťující počet vyšetřovaných dětí, adolescentů a dospělých, a to jak pro včasnou diagnostiku, tak pro výběr kontingentů pro revakcinaci BCG v regionu, městě, okrese, vypracovává středisko státního hygienického a epidemiologického dozoru společně s hlavními pediatry (terapeuty) a antituberkulózními dispenzáři.

Pokud jde o tuberkulinovou diagnostiku v regionu, městě, okrese, poskytují:

- registrace všech dětí, dospívajících a dospělých, kteří podléhají každoroční tuberkulinové diagnostice, s rozdělením věkových skupin, které podléhají revakcinaci;

- plán podmíněného průzkumu;

- školení zdravotnického personálu pro tuberkulinovou diagnostiku;

- nákup požadovaného množství nástrojů;

- výpočet potřeby tuberkulinu.

Potřeba čištěného tuberkulinu ve standardním ředění (2 TE PPD-L) se vypočítá rychlostí dvou dávek 0,1 ml pro každého subjektu. Je třeba mít na paměti, že ampule obsahuje 30 dávek (3 ml), které se používají k testování 15 osob. Jeden litr tuberkulinu obsahuje 10 000 dávek, které se používají k vyšetření 5 000 lidí.

Likvidace tuberkulinu

ČISTÉ TUBERKULINY (PPD) PRO ZVÍŘATA

Purifikované tuberkuliny (PPD) pro zvířata. Specifikace

Datum zavedení 2015-01-01

Cíle, základní principy a základní postupy pro provádění prací na mezistátní normalizaci stanoví GOST 1.0-92 "Mezistátní normalizační systém. Základní ustanovení" a GOST 1.2-2009 "Mezistátní normalizační systém. Mezistátní normy, pravidla a doporučení pro mezistátní normalizaci. Pravidla pro vývoj, přijetí, přihláška, obnovení a zrušení “

Informace o normě

1 VYVINUTO Spolkovým státním rozpočtovým ústavem „Všeruské státní středisko pro kvalitu a standardizaci léčivých přípravků pro zvířata a krmiva“ (FSBI „VGNKI“) a spolkovým státním jednotným podnikem „Kursk Biofabrika - firma„ BIOC “(FSUE„ Kursk Biofabrika “)

2 UVEDENO Federální agenturou pro technickou regulaci a metrologii Ruské federace (TC 454)

3 PŘIJATÉ Mezistátní radou pro normalizaci, metrologii a certifikaci (zápis z 27. září 2013, N 59-P)

Hlasovali pro přijetí normy:

Krátký název země
podle MK (ISO 3166) 004-97

Zkrácený název národního normalizačního orgánu

Ministerstvo hospodářství Arménské republiky

Gosstandart Běloruské republiky

Gosstandart Republiky Kazachstán

4 Usnesením Federální agentury pro technickou regulaci a metrologii ze dne 17. října 2013 N 1169-st byla mezistátní norma GOST 32306-2013 zavedena jako národní norma Ruské federace od 1. ledna 2015.

5 VYMĚŇTE GOST 16739-88 a GOST 23881-79


Informace o změnách této normy jsou zveřejněny v ročním informačním rejstříku „Národní normy“ a text změn a dodatků je zveřejněn v měsíčním informačním rejstříku „Národní normy“. V případě revize (nahrazení) nebo zrušení tohoto standardu bude příslušné oznámení zveřejněno v měsíčním informačním rejstříku „Národní standardy“. Příslušné informace, oznámení a texty jsou také zveřejněny ve veřejném informačním systému - na oficiálních stránkách Federálního úřadu pro technickou regulaci a metrologii na internetu.

1 oblast použití

1 oblast použití

Tato norma platí pro purifikované tuberkuliny (PPD) u zvířat používaných k diagnostice tuberkulózy u zvířat při hypersenzitivních reakcích opožděného typu (dále jen tuberkuliny).

2 Normativní odkazy

Tato norma používá odkazy na následující normy:

GOST 12.0.004-90 Systém norem bezpečnosti práce. Organizace školení bezpečnosti práce. Obecná ustanovení

GOST 12.1.005-88 Systém norem bezpečnosti práce. Obecné hygienické a hygienické požadavky na vzduch v pracovním prostoru

GOST 12.1.008-76 Systém norem bezpečnosti práce. Biologická bezpečnost. Obecné požadavky

GOST 12.4.011-89 Systém norem bezpečnosti práce. Ochranné prostředky pro pracovníky. Obecné požadavky a klasifikace

GOST 177-88 Peroxid vodíku. Specifikace

Reagencie GOST 244-76. Krystalický thiosíran sodný. Specifikace

Reagencie GOST 1277-75. Dusičnan stříbrný. Specifikace

GOST 1770-74 (ISO 1042-83, ISO 4788-80) Laboratorní sklo. Válce, kádinky, baňky, zkumavky. Specifikace

Reagencie GOST 4160-74. Bromid draselný. Specifikace

Reagencie GOST 4204-77. Kyselina sírová. Specifikace

Reagencie GOST 4232-74. Jodid draselný. Specifikace

Reagencie GOST 4233-77. Chlorid sodný. Specifikace

Reagencie GOST 4328-77. Hydroxid sodný. Specifikace

Reagencie GOST 4457-74. Kyselina bromičitá draselná. Specifikace

Reagencie GOST 4459-75. Chroman draselný. Specifikace

GOST 4919.1-77 Činidla a vysoce čisté látky. Metody pro přípravu řešení indikátorů

GOST 6709-72 Destilovaná voda. Specifikace

GOST ISO 7218-2011 Mikrobiologie potravin a krmiv. Obecné požadavky a doporučení pro mikrobiologický výzkum

GOST 7933-89 Karton pro spotřebitelské balení. Obecné Specifikace

GOST 9142-90 Krabice z vlnité lepenky. Obecné Specifikace

GOST 12026-76 Laboratorní filtrační papír. Specifikace

GOST 12301-2006 Krabice z lepenky, papíru a kombinovaných materiálů. Obecné Specifikace

GOST 12303-80 Balení z lepenky, papíru a kombinovaných materiálů. Obecné Specifikace

GOST 14192-96 Značení zboží

GOST 14261-77 Vysoce čistá kyselina chlorovodíková. Specifikace

GOST ISO / IEC 17025-2009 Obecné požadavky na způsobilost zkušebních a kalibračních laboratoří

Balení GOST 17527-2003. Termíny a definice

GOST 18300-87 Rektifikovaný technický ethylalkohol. Specifikace

GOST 18481-81 Skleněné hustoměry a válce. Obecné Specifikace

GOST 22967-90 Opakovaně použitelné lékařské injekční stříkačky. Obecné technické požadavky a zkušební metody

GOST 24861-91 (ISO 7886-1-2009) Injekční stříkačky na jedno použití

GOST 25046-81 (ISO 7864-2009) Injekční jehly na jedno použití. Základní rozměry. Technické požadavky. Zkušební metody

GOST 25336-82 Laboratorní sklo a vybavení. Typy, hlavní parametry a rozměry

GOST 28083-2012 Biologické léčivé přípravky pro veterinární použití. Metoda vakuového ovládání v ampulích a lahvičkách

GOST 28085-2012 * Biologické léčivé přípravky pro veterinární použití. Metoda bakteriologické kontroly sterility

________________
* GOST 28085-2013 je v platnosti na území Ruské federace. - Poznámka od výrobce databáze.

GOST 29230-91 (ISO 835-4-81) Laboratorní sklo. Odměrné pipety. Část 4. Vyfoukněte pipety

GOST 29251-91 (ISO 385-1-84) Laboratorní sklo. Byrety. Část 1. Obecné požadavky

GOST 31926-2013 Veterinární léčivé přípravky. Metody stanovení neškodnosti

GOST 31929-2013 Veterinární léčivé přípravky. Pravidla přejímky, metody odběru vzorků

Poznámka - Při používání této normy je vhodné zkontrolovat fungování referenčních norem ve veřejném informačním systému - na oficiálních webových stránkách Federální agentury pro technickou regulaci a metrologii na internetu nebo podle ročního informačního rejstříku „Národní normy“, který byl zveřejněn k 1. lednu aktuálního roku, a vydáním měsíčního informačního indexu „Národní standardy“ pro aktuální rok. Pokud je referenční standard nahrazen (změněn), pak by se při používání tohoto standardu mělo postupovat podle nahrazujícího (upraveného) standardu. Pokud je referenční standard zrušen bez náhrady, použije se ustanovení, ve kterém je uveden odkaz na něj, v rozsahu, který na tento odkaz nemá vliv..

3 Termíny, definice a zkratky

3.1 V této normě se používají pojmy podle GOST 17527, jakož i následující pojmy s odpovídajícími definicemi:

1 purifikovaný tuberkulin (PPD) pro zvířata: Léčivo, které je purifikovanou proteinovou frakcí izolovanou z kultivačního filtrátu patogenů skotu nebo ptačí tuberkulózy pěstovaných na syntetickém živném médiu a tepelně inaktivovaných.

3.1.2 Bacille de Calmette et de Guerin, BCG: Vakcinační kmen M. bovis mycobacterium tuberculosis se sníženou virulencí, získaný jako výsledek dlouhodobé kultivace na glycerin-bramborovém médiu se žlučí.

3.1.3 jednotka mezinárodní činnosti, ME: jednotka činnosti Mezinárodního standardu tuberkulinu Světové zdravotnické organizace (WHO).

4 standard purifikovaného tuberkulinu (PPD) pro zvířata (referenční vzorek): Série purifikovaného tuberkulinu (PPD) pro savce nebo purifikovaného tuberkulinu (PPD) pro ptáky v lyofilizované formě, kalibrovaná na aktivitu podle současných mezinárodních standardů přijatých Světovou zdravotnickou organizací (WHO) čištěný tuberkulin PPD skotu nebo čištěný tuberkulin PPD avium a vydal pas označující obsah v ampulkách mezinárodních jednotek činnosti.

3.2 V této normě se používají následující zkratky:

HRT - hypersenzitivita opožděného typu;

PPD - proteinově purifikovaný derivát (PPD);

TCA - kyselina trichloroctová.

4 Klasifikace

Tuberkuliny se vyrábějí ve dvou typech: čištěný tuberkulin (PPD) pro savce a čištěný tuberkulin (PPD) pro ptáky.

Tuberkuliny jsou k dispozici v kapalné a lyofilizované formě.

5 Podmínky zkoušky a bezpečnostní požadavky

5.1 Zkušební podmínky

5.1.1 Obecné požadavky na mikrobiologickou analýzu a práci s mikroorganismy skupin patogenity III-IV - podle GOST ISO 7218.

5.1.2 Obecné požadavky na prostory - podle GOST ISO 7218.

5.1.3 Požadavky na personál - podle GOST ISO 7218, GOST ISO / IEC 17025.

Testy mohou provádět kvalifikovaní zaměstnanci se zkušenostmi v práci s mikroorganismy skupin patogenity III-IV, kteří studovali metody mikrobiologické práce.

5.2 Bezpečnostní požadavky

5.2.1 Z důvodu biologické bezpečnosti musí tuberkuliny splňovat požadavky GOST 12.1.008.

5.2.2 Požadavky na školení pracovníků bezpečnosti práce - podle GOST 12.0.004.

5.2.3 Ochranné prostředky pro pracovníky - podle GOST 12.4.011 musí vzduch pracovního prostoru splňovat požadavky GOST 12.1.005.

5.2.4 Likvidace prošlých tuberkulinů a šarží, které neprošly kontrolními testy, jakož i tuberkulinu v lahvičkách ponechaných po zkouškách ukazatelů kvality a archivovaných vzorků po uplynutí doby použitelnosti nevyžaduje zvláštní bezpečnostní opatření.

6 Technické požadavky

6.1 Tuberkuliny musí splňovat požadavky této normy a musí být vyráběny v souladu s technologickými výrobními předpisy schválenými výrobní organizací v souladu s postupem platným na území státu, který normu přijal.

6.2 Tuberkuliny z hlediska organoleptických, fyzikálně-chemických, chemických a biologických vlastností musí vyhovovat požadavkům a normám uvedeným v tabulce 1.


stůl 1

Charakteristika a norma

Světle hnědá průhledná kapalina bez sedimentu

Suchá krystalická hmota světle hnědé barvy

Vakuum v ampulích

Musí existovat vakuum

Rozpustnost a homogenita roztoku

Měl by se úplně rozpustit do 3 minut za vzniku čirého světle hnědého roztoku bez sedimentu

Koncentrace vodíkových iontů, jednotky pH

6,5-7,5 po přidání rozpouštědla mykobakteriálních alergenů

1,0 po přidání rozpouštědla mykobakteriálních alergenů

Hmotnostní podíl glycerinu,%, nic víc

Hmotnostní podíl chloridu sodného,%

Hmotnostní podíl fenolu,%, nic víc

Musí být sterilní

V místě intradermální injekce tuberkulinu by neměla docházet k zánětlivé reakci, je povoleno zarudnutí o průměru ne větším než 5 mm

Mělo by to být neškodné

Živé mykobakterie musí být nepřítomné

Opakované intradermální podání by nemělo u zvířat způsobit přecitlivělost (senzibilizaci) opožděného typu.

Aktivní ne méně než 66% a ne více než 150% hodnoty očekávané aktivity

10 000 po přidání rozpouštědla mykobakteriálních alergenů

Aktivní ne méně než 75% a ne více než 133% hodnoty očekávané aktivity

25 000, po přidání rozpouštědla mykobakteriálních alergenů

Specifičnost tuberkulinu (PPD) pro savce,%, nic víc

10 [z aktivity tuberkulinu (PPD) pro ptáky na morčatech senzibilizovaných M. avium]

Specifičnost tuberkulinu (PPD) pro ptáky,%, nic víc

10 [z aktivity tuberkulinu (PPD) pro savce u morčat senzibilizovaných M. bovis]

6.3 Balení a označování

6.3.1 Tuberkulin v tekuté formě je balen po 1–20 ml ve sterilních lahvičkách nebo ampulích odpovídající kapacity. Lahvičky jsou uzavřeny gumovými zátkami a stočeny hliníkovými víčky. Ampule jsou uzavřeny.

6.3.2 Pro lyofilizaci je tuberkulin balen ve sterilních lahvičkách nebo ampulích o objemu 1–20 ml, takže při rozpouštění tuberkulinu (PPD) pro savce v dodávaném rozpouštědle je aktivita 10 000 IU / cm, při rozpouštění tuberkulinu (PPD) pro ptáky - 25 000 IU / cm. Po lyofilizaci jsou lahvičky uzavřeny gumovými zátkami a svinuty v hliníkových uzávěrech. Ampule jsou uzavřeny ve vakuu.

6.3.3 Lahvičky (ampule) s tuberkulinem jsou na skle označeny nesmazatelnou barvou nebo jsou připevněny štítky.

6.3.4 Lahvičky (ampule) s tuberkulinem jsou baleny v kartonových krabicích podle GOST 12301 nebo v baleních podle GOST 12303 s dělícími přepážkami vyrobenými z lepenky podle GOST 7933, což zajišťuje bezpečnost lahví (ampule).

Pro zajištění bezpečnosti injekčních lahviček (ampule) jsou povoleny jiné typy balení..

6.3.7 Krabice (balení) s tuberkulinem jsou baleny do krabic z vlnité lepenky podle GOST 9142 (s lepenkovými těsněními) o celkové hmotnosti nepřesahující 15 kg.

6.3.7.1 Uvnitř každé krabice je umístěn balicí list označující:

- název výrobní organizace;

- název léčivého přípravku;

- čísla sérií;

- počet balicích jednotek v krabici;

- jméno nebo číslo balírny.

Poznámka - Je povoleno nevkládat balicí list do rámečku..

6.3.8 Štítek přepravního kontejneru musí uvádět:

- název a adresa (s uvedením země) výrobní organizace;

- ochranná známka výrobní organizace;

- název léčivého přípravku;

- číslo šarže;

- datum vydání (měsíc, rok);

- počet krabic (balení);

- nápis: „dobrý dříve“;

- podmínky skladování a přepravy;

- nápis: "Pro veterinární použití".

6.3.9 Na každou krabici je v souladu s GOST 14192 umístěno přepravní označení s manipulačními značkami: „Křehký. Pozor“, „Chraňte před slunečním zářením“, „Omezení teploty“, „Nahoře“.

6.3.10 Kombinace přepravního označení a označení charakterizujícího údaje o balených výrobcích na jedné straně přepravního kontejneru není povolena.

7 Pravidla přijetí

7.1 Každá šarže tuberkulinu musí být přijata (zkontrolována) ve výrobní organizaci útvarem odpovědným za kontrolu kvality hotových výrobků v souladu s GOST 31929.

7.2 Série tuberkulinu je určité množství léčivého přípravku vyrobeného v jednom technologickém cyklu a vydaného v jednom dokumentu jakosti.

7.3 Dokument o jakosti uvádí:

- název a adresu výrobní organizace;

- název léčivého přípravku;

- číslo šarže;

- objem várky;

- datum výroby (měsíc, rok);

- výsledky analýzy ukazatelů kvality;

- nápis: „dobrý dříve“;

- označení této normy;

- číslo dokladu o kvalitě a datum jeho vydání;

- podpis oprávněné osoby výrobní organizace, která vydala dokument jakosti.

7.4 Po kontrole vzhledu, kvality balení a označení jsou náhodným odběrem vzorků podle GOST 31929 odebrány vzorky z dávky tuberkulinu, jejichž počet by měl zajistit provedení zkoušek ve třech opakováních. Současně se odebírají vzorky ve stejném množství k uložení do archivu oddělení odpovědného za kontrolu kvality hotového výrobku výrobní organizace. Po testování jsou vzorky drogy odeslány do archivu podle indikátorů stanovených touto normou.

Doba skladování v archivu je dva roky pro tekutý tuberkulin a tři roky pro lyofilizovaný tuberkulin.

Archivní vzorky jsou označeny štítkem. Štítek označuje:

- název léčivého přípravku;

- číslo šarže;

- datum vydání (měsíc, rok);

- datum záložky v archivu;

- doba uložení v archivu;

- počet vzorků vybraného léčivého přípravku;

- pozice a podpis osoby odebírající vzorky.

Vzorky jsou označeny „Archiv“.

7.5 Po obdržení neuspokojivých výsledků zkoušek pro alespoň jeden z indikátorů se provedou opakované testy tohoto indikátoru na dvojnásobném počtu vzorků tuberkulinu odebraných ze stejné šarže. Výsledky opakovaného testu jsou platné pro celou dávku. Po obdržení neuspokojivých výsledků opakovaného testování se dávka tuberkulinu považuje za nevyhovující požadavkům této normy a je vyřazena.

8 Zkušební metody

________________
* Pravděpodobně chyba v originálu. Mělo by se číst: GOST 4919.1. - Poznámka od výrobce databáze.


- indikátorový škrob, 1% roztok;

8.2 Určení vzhledu

Pro stanovení vzhledu je každá lahvička (ampule) s tuberkulinem viděna vizuálně na přímém světle a lahvička (ampule) s tuberkulinem v kapalné formě a v procházejícím světle.

8.3 Stanovení přítomnosti vakua v ampulích

Přítomnost vakua v ampulích se stanoví podle GOST 28083.

8.5 Stanovení koncentrace vodíkových iontů

Stanovení koncentrace vodíkových iontů (pH) tuberkulinu se provádí potenciometrickou metodou za použití pH metru. pH metr se používá podle pokynů výrobce.

Tuberkulin v lyofilizované formě se předběžně rozpustí v souladu s 8.4.

8.6 Stanovení množství bílkovin

Množství proteinu v tuberkulinu se stanoví Kjeldahlovou metodou nebo fotoelektrokolorimetrickou metodou. Testy se provádějí nejméně ve třech opakováních..

Tuberkulin v lyofilizované formě se předběžně rozpustí podle 8.4.

8.6.1 Stanovení bílkovin z dusíku bílkovin Kjeldahlovou metodou

8.6.1.1 Zkušební postup

Pipeta od 1 do 5 cm tuberkulinového vzorku se napipetuje do zkumavky, přidá se stejný objem 20% roztoku TCA a umístí se na nejméně 4 hodiny do chladničky při teplotě 4 ° C až 6 ° C. Sražený protein se filtruje přes filtr bez popela a zbývající protein se ze zkumavky odmyje 5% roztokem TCA. Protein na filtru se třikrát promyje 5% roztokem TCA, aby se odstranil zbytkový dusík. Filtr s koagulovaným proteinem je mírně vysušen na vzduchu, vložen do Kjeldahlovy baňky, přidáno je 2 až 5 cm3 koncentrované kyseliny sírové (hustota 1,84 g / cm3) a mineralizováno při teplotách od 300 ° C do 400 ° C. Mineralizace se provádí v přítomnosti katalyzátoru - peroxidu vodíku, který se přidává o 0,5 cm každých 1,5 - 2,0 hodiny, dokud se roztok zcela nezbarví. Na konci mineralizace se baňka se vzorkem ochladí na teplotu místnosti, obsah baňky se přenese do baňky k destilaci, zbývající roztok se promyje podíly destilované vody o celkovém objemu nejméně 20 cm. Úplnost převodu se kontroluje podle indikátoru methyl oranžová. Poslední flush by měl zůstat žlutý.

V Erlenmeyerově baňce nalijte 10-20 cm3 roztoku kyseliny sírové s molární koncentrací 0,05 mol / cm a 10-15 kapek Tashirova indikátoru. Tashiro indikátor se připraví smícháním stejných objemů 0,2% alkoholového roztoku methylové červeně a 0,1% alkoholového roztoku methylenové modři.

Obsah baňky se zneutralizuje 30% až 33% roztokem hydroxidu sodného, ​​který se přidává rychlostí asi 6 cm na 1 cm koncentrované kyseliny sírové odebrané pro mineralizaci. Odizolovací baňka je připojena ke kondenzátoru a parnímu generátoru. Poté se obsah baňky oddestiluje. Amoniak se oddestiluje, dokud se v jímací baňce neshromažďuje alespoň 20 cm3 roztoku. Konec destilace se kontroluje indikátorovým papírem.

Obsah přijímací baňky se titruje roztokem hydroxidu sodného o molární koncentraci 0,1 mol / cm, dokud se barva roztoku nezmění z lila na zelenou (indikátor Tashiro činidlo).

Souběžně se stanoví obsah dusíku ve filtru bez popela (podobně jako stanovení ve zkušebním vzorku).

kde je objem roztoku kyseliny sírové s molární koncentrací 0,05 mol / dm 3, cm;

- objem roztoku hydroxidu sodného o molární koncentraci 0,1 mol / dm3 spotřebovaný pro titraci bezpopelnatého filtru (kontrola), cm;

- objem roztoku hydroxidu sodného s molární koncentrací 0,1 mol / dm3 spotřebovaný pro titraci zkušebního vzorku, cm;

- korekční faktor pro titr roztoku kyseliny sírové s molární koncentrací 0,05 mol / dm3;

- korekční faktor pro titr roztoku hydroxidu sodného s molární koncentrací 0,1 mol / dm3;

1.4 - přepočítací faktor pro dusík (1 cm3 roztoku kyseliny sírové s molární koncentrací 0,05 mol / dm3 odpovídá 1,4 mg dusíku);

6,25 - přepočítací faktor pro protein (molekula proteinu obsahuje přibližně 16% dusíku);

- objem vzorku odebraný k testování, cm.

8.6.2 Stanovení obsahu bílkovin fotoelektrokolorimetrií

8.6.2.1 Příprava zkoušky

Stanovení koncentrace proteinu se provádí pomocí kalibrační křivky. Pro sestavení kalibrační křivky se ve zkumavkách připraví ředění tuberkulinu se známou koncentrací proteinu od 0,01 do 0,20 mg / cm s krokem ředění 0,01 mg / cm za použití destilované vody. K získaným ředěním se přidá stejný objem 20% roztoku TCA a promíchá se. Suspenze koagulovaného proteinu z každé zkumavky se přenese do kyvety a optická hustota se stanoví na fotoelektrickém kolorimetru při vlnové délce (540 ± 20) nm (zelený filtr). Jako kontrolní roztok se použije destilovaná voda s přídavkem stejného objemu 20% roztoku TCA. Měření optické hustoty se provádí 2-3 minuty po přidání TCA. Na základě získaných dat se vynese kalibrační křivka, vynesením koncentrace proteinu podél vodorovné osy a odpovídající hodnoty optické hustoty podél svislé osy.

8.6.2.2 Zkušební postup

Připraví se ředění testovaného vzorku s přibližným obsahem proteinu 0,02-0,20 mg / cm3. Přidá se stejný objem 20% roztoku TCA, po 2–3 minutách se suspenze koagulovaného proteinu přenese do kyvety a stanoví se optická hustota. Pomocí kalibrační křivky určete koncentraci proteinu ve zředěném vzorku. S přihlédnutím k ředění zkušebního vzorku vypočítejte obsah bílkovin.

8.7 Stanovení hmotnostního podílu glycerinu

8.7.1 Zkušební postup

Suchý válec o objemu 250 ml je naplněn fyziologickým roztokem a jeho hustota je měřena hustoměrem. Počítání dílků stupnice hustoměru se provádí podél spodního menisku kapaliny ve válci.

Hustota vzorku tuberkulinu se stanoví stejným způsobem..

8.7.2 Vyjádření výsledků

Pro stanovení hustoty glycerolu ve vzorku tuberkulinu se od indexu hustoty vzorku tuberkulinu odečte index hustoty fyziologického roztoku odebraného ke kontrole. Získaný výsledek se porovná s údaji v tabulce 2 a stanoví se hmotnostní zlomek glycerinu.


Tabulka 2 - Závislost hustoty roztoku tuberkulinu na hmotnostním podílu glycerinu

Články O Zánět Hltanu